根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性,造成神经传导介质乙酰胆碱的积累,影响正常传导,使昆虫中毒死亡这一昆虫毒理学原理,用在对农药残留的检测中。如果蔬菜的提取液中不含有机磷或氨基甲酸酯类农药或残留量较低,酶的活性不被抑制,试验中加入的底物就被酶水解,水解产物与加入的显色剂反应产生颜色。反之,如果蔬菜的提取液中含有一定量的有机磷或氨基甲酸酯类农药酶的活性就被抑制或部分被抑制,试验中加入的底物就不能被酶水解或少部分被水解,从而不显色或颜色变化很小,用分光光度计测定吸光值随时间的变化情况计算出抑制率,就可以判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸酯类农药的残留情况。
用电源线将仪器与电源插座接通,充电指示灯点亮,仪器内部的充电电池组开始进行充电,此时不影响仪器使用,8小时后,电池充满。注意:新仪器头三次充电要将电池电量放尽(所谓放尽是指切断电源线,按下电源开关,当仪器不再显示数字时即为电量放尽),这样可以使充电电池组性能达到最佳状态。
被测样本的抽取:
随机抽取果菜容器各部位的蔬菜,每种样本至少取0.5—1.0公斤左右,并尽量具有代表性。
一、样品的制备及前处理:
1、用剪刀或刀片取来自不同植株叶片(至少8—10片叶子)的样本;水果及果菜从表皮至果肉1—1.5CM处取样,待用。
2、将酶液、显色剂、底物溶剂从冰箱冷冻室中取出,在室温条件下融化;将缓冲剂从冰箱冷藏室中取出,将上述试剂在室温下自然升温至室温,待用。
3、天平称取2g切碎的样本(非叶菜类取4g),放入一只100ml烧杯中,用量桶量取20ml缓冲溶剂倒入其中,振荡1—2分钟,倒出提取液,静置3—5分钟。取两只塑料试管,分别标上“对照”、 “1”,用微量取样器分别加入50ul酶溶剂;在“对照”试管中用移液管加入3ml缓冲溶剂,1号试管中用移液管加入3ml提取液,再用微量取样器向两支试管中分别加入50ul显色溶剂(此时“对照”试管中的液体称为对照样本,1号试管中的液体称为被测样本。如有多个被测样本,可同时进行,先取4只塑料试管,分别标上“2”、 “3”、 “4”、 “5”,然后向每个试管中分别加入3ml提取液,再各加入50ul酶液和显色溶剂);于37℃恒温箱或恒温水浴锅中放置20-30分钟(如无恒温箱和恒温水浴锅,可在室温下进行,但温度应保持在25—40℃)。
二、仪器的预热及调试:
取出仪器,接通电源,打开电源开关,显示屏显示“TFC”,3秒钟后自动显示“T”,仪器进入预热状态(10分钟后才可进行测试)。打开圆盖,取出旋转比色槽中的比色皿;将圆盖上的标识与旋转比色槽上的标识一一对应,盖上圆盖,顺时针转动圆盖,使圆盖上的“对照”对准仪器上的光孔标志。按一下功能键,显示一数字,此数字无意义,仪器调试完毕,准备进行测试工作。
按一下功能键,显示“A”,取下圆盖,将经过30分钟恒温培养的对照样本及被测样本从恒温箱或恒温水浴中取出,用微量取样器向对照样本中加入50ul底物溶剂,盖上盖立刻剧烈摇一下后,取出标有“对照”的比色皿,将对照样本倒入其中,将比色皿放入标有“对照”的比色槽中,盖上圆盖,按一下功能键,显示数字后1秒钟时立刻按一下功能键,显示“----”, 同时顺时针转动圆盖,使“1”对准光孔标志,3秒钟后自动显示“A1”,,取下圆盖,向第一个被测样本中用微量取样器加入50ul底物,盖上盖剧烈摇一下后立刻倒入1号比色皿中,放入1号比色槽中,盖上圆盖,再按一下功能键,当显示数字后一秒钟时立刻按一下功能键,显示“----”, 同时顺时针转动圆盖,将2对准光孔标志,3秒钟后自动显示“A2”,取下圆盖;向第2个被测样本中加入50ul底物,盖上盖剧烈摇一下后立刻倒入2号比色皿中,将其放入2号比色槽中,盖上圆盖,按一下功能键,显示数字后1秒钟时按一下功能键,显示“----”, 同时顺时针转动圆盖,3秒钟后,自动显示“A3”,,将“3”对准光孔标志,取下圆盖;向第3个被测样本中加入50ul底物,盖上盖剧烈摇一下,立刻倒入3号比色皿中,放入3号比色槽中,盖上圆盖,按一下功能键,当显示数字后1秒钟时,立刻按一下功能键,显示“----”, 同时顺时针转动圆盘,3秒钟后显示“A4”,使4对准光孔标志,取下圆盖;向第4个被测样本中加入50ul底物,盖上盖剧烈摇一下,立刻倒入4号比色皿中,将其放入4号比色槽中,盖上圆盖,按一下功能键,显示数字后1秒钟时立刻按一下功能键,显示“----”, 同时顺时针转动圆盘, 使5对准光孔标志,3秒钟后显示“A5”, 取下圆盖;向第5个被测样本中加入50ul底物, 盖上盖剧烈摇一下, 立刻倒入5号比色皿中,将其放入5号比色槽中,盖上圆盖,按一下功能,显示数字后1秒钟时立刻按一下功能键,3秒钟后仪器显示倒计时间,单位是“秒”。顺时针转动圆盖,将“对照”对准光孔标志,这时,请不要动仪器的任何按键,仪器进入程序自控状态。当倒计时结束时,仪器显示“A′”,按一下功能键,显示不断变化的数字,当显示“A1′”时,顺时针转动圆盖,将1对准光孔标志,按一下功能键,显示不断变化的数字,当显示“A2′”时,顺时针转动圆盖,将2对准光孔标志,按一下功能键,显示不断变化的数字,当显示“A3′”时,顺时针转动圆盖,将3对准光孔标志,按一下功能键,显示不断变化的数字,当显示“A4′”时,顺时针转动圆盖,将4对准光孔标志,按一下功能键,显示不断变化的数字,当显示“A5′”时顺时针转动圆盖,将5对准光孔标志,按一下功能键,显示不断变化的数字,当仪器显示“----”时,按一下功能键,显示“E1”,1秒钟后自动显示的数字即为第一个被测样本的测试结果,再按一下功能键,显示“E2”,1秒钟后自动显示的数字即为第2个被测样本的被测结果,再按一下功能键,显示“E3”,1秒钟后自动显示的数字即为第3个被测样本的测试结果,再按一下功能键,显示“E4”,1秒钟后自动显示的数字即为第4个被测样本的测试结果。再按一下功能键,显示“E5”,1 秒钟后自动显示的数字即为第5个被测样本的测试结果,再按一下功能键,显示“P ?”,如需将测试结果打印出来,按一下调整键,打印机即可将测试结果打印出来。打印完毕后仪器显示“T”,转动圆盖,将1对准小三角,进入下一次测试的预备状态。
以上测试过程要尽快完成,尽量缩短时间,这样才可使测试的结果更加精确,切记!!
测试结果计算:
△Ac — △As
抑制率(%)= ────────── * 100
△Ac
△Ac:对照样本3分钟后与3分钟前吸光值之差
△As:被测样本3 分钟后与3分钟前吸光值之差
以上计算过程由仪器本身完成,不用人为计算。
测试结果以酶的抑制率(百分数)来表示。
测样本的抑制率70%时,说明蔬菜中可能含有某种有机磷类或氨基甲酸酯类农药残留。抑制率≥70%的样本要反复检测2次以上,几次重复检测的重现性应在80%以上,方可做出肯定结论。
结果处理程序:
被测样本经检测后,如抑制率超标,则需重复检测两次以上,如仍不合格,就用气相色谱法进一步定性定量分析(GB/T17331-1998)。
1、打印:如需将测试结果打印出来,只需按一下打印键即可。
2、打印纸的更换:如打印纸用完需要更换新的打印纸时,先要将仪器主机电源开,打印机指示灯点亮,用手指抠住打印机面板两边的凹槽,向上提即可将其打开,换上新纸卷后,将纸的一端插进进纸槽中,按下“SEL”键,打印机指示灯熄灭,按下“LF”键,打印机即开始输纸,等到打印纸露出1厘米左右时,按下“SEL”键,打印机停止供纸,打印纸更换完毕。然后将面板复位。
3、色带的更换:将打印机面板两边的凹槽,向上提起,将色带取出,换上新色带即可。然后将面板复位。
如果还有不清楚的情况可请问专业人员!