流动相用一高压泵输入。这种高压泵应满足以下条件：流量恒定，无脉动，并有较大的调节范围。能抗溶剂腐蚀。有较高的输出压力，一般要达到15～300kg/c，也有的高达800kg/c。泵的死体积要小。梯度洗脱装置必须具备两台高压泵，一台输送强溶剂，一台输送弱溶剂，两泵运转速度用电脑控制，并可按一定的要求改变流动相的组成，以改善分离效果。一般用微量注射器直接进样，也可采用六通阀门进样。HPLC中所用的检测器最多应用的是紫外吸收检测，灵敏度可达ng水平。此外，还有荧光检测器、示差析光检测器、电化学检测器等。

　　常见应用：

　　1、鉴定食物成分：鉴定食物成分的过程是相当复杂的，包括分离、淬取、纯化，而且还要有高效液相层析仪、质谱仪、核磁共振仪、元素分析仪等先进的分析仪器。

　　2、微波炉检测农药残留：首先是采集蔬果、茶叶，或土坏、环境中的样品，加水混合稀释，置入微波炉内的烧瓶内，一面搅拌，一面微波加热。水被汽化后，会带着化学物质一起往上飘，经冷却系统凝结并搜集，最后再经GC（气相层析仪）或HPLC（高效率液相层析仪）检验。

　　3、从蛇毒中分离纯化类凝血酶：采用阳离子交换层析、阴离子交换层析和凝胶排阻层析三步法从蛇毒中分离纯化类凝血酶，在带有梯度洗脱并能同时显示紫外和电导参数装置的高、中、低压层析仪上进行；性测定参照胰蛋白酶测定法，用BAEE作底物。该发明可以方便、快速地从蛇毒中提取类凝血酶，其纯度和生物活性均可达到药用标准。与传统方法相比较，该发明生产工艺简单，回收率高，活性损失小，并可几乎线性放大到工业规模化生产。

　　层析仪正确使用：层析仪是精密的仪器，流动相中的不溶物、缓冲液中盐的析出、流动相中的气泡、仪器管道或阀门内长菌或微生物都会影响仪器的寿命或性能，在操作过程中对有关方面应该特别注意，正确使用仪器以保证发挥仪器良好的性能并延长仪器寿命。

　　1、层析仪使用完毕后如果放置过夜，应用低盐缓冲液（最好是去离子水）彻底清洗所有管道和阀门。

　　2、如果层析仪一段时间不用，用去离子水清洗后，再用20%乙醇或0.05%叠氮化钠溶液充满管道，长期不用要把泵、阀门、检测器等出入口用随机带的塞子封闭以免溶液挥发。防止仪器管道阀门内部长菌或微生物，高温天气尤其要注意。长菌或微生物后很难除去。

　　3、层析仪存放应置干燥通风环境，防止仪器长霉菌或锈蚀。如果仪器放在低温环境(冷室或层析柜)，不要关闭电源，防止水蒸气凝结。